什么是 dbDNA   dbDNA?（doggyboneDNA?）是 Touchlight 公司研发的创新型专利 DNA 合成技术，该方法不再使用细菌发酵生产质粒 DNA 载体的方法，而使用酶学生产工艺，以前所未有的速度、纯度、规模生产 DNA。  doggyboneDNA? 以其原理结构命名，是一种小的、线性的、双链的共价闭合 DNA 结构，其形状类似于似“狗骨头”（doggybone）。dbDNA? 可以编码长片段、复杂或不稳定的 DNA 序列，并无需细菌 DNA，包括抗生素耐药基因。  如何使用酶学方法生产 dbDNA？   1、环状双链 DNA 模板，变性成为两条环状单链   起始 DNA 模板为环形结构，包含骨架序列、端粒酶识别序列、目标基因。该环状双链 DNA 模板，经化学变性，形成两条单链环状 DNA。  2、使用 Phi29 DNA 聚合酶进行滚环扩增  体系中加入 Phi29 DNA 聚合酶进行滚环扩增，形成长的双链 DNA，该 DNA 为骨架序列和目标基因的串联体，由端粒酶识别序列间隔。   3、端粒酶切割并形成共价闭合   TelN 端粒酶锚定间隔的端粒酶识别序列，切割后，在双链 DNA 末端形成共价闭合，即形成 dbDNA。   4、DNA 骨架序列的切割和清除   经切割和连接所形成的 dbDNA 有两种：骨架序列 dbDNA（需清除）、 目标基因 dbDNA（需保留），骨架序列 dbDNA 含有限制性内切酶识别序列，使用内切酶可从中切断，形成双链末端，使用核酸外切酶 III 可对双链末端进行切割，即可达到清除骨架序列 dbDNA 的目的。   使用体外酶促工艺生产 dbDNA 有什么优势？ 速度更快：体外酶促法仅需数周即可生产克量级 dbDNA，比传统的细菌发酵法生产质粒 DNA 快 5 倍。生产规模：仅需使用台式仪器设备，比发酵方法需要的空间面积更小；简易便携：dbDNA 技术更加简易便携，更易于技术转移；优化载体：dbDNA?可以编码更长、更复杂/不稳定的基因，且无需细菌 DNA，无需抗性筛选，因此消除了抗性基因带来的风险。 体外酶促工艺生产 dbDNA 能应用在哪些方面？ mRNA 疫苗（体外转录模板）DNA 疫苗基因治疗载体基因编辑慢病毒质粒 DNA腺病毒质粒 DNA  体外酶促工艺生产 dbDNA 会用到哪些核心酶？   1、Phi29 DNA 聚合酶（M0269）：phi29 DNA 聚合酶是从嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的噬菌体 phi29（φ29）中克隆出的 DNA 聚合酶，由 NEB 首先克隆并重组。此酶具有超强链置换能力和卓越的连续合成能力，具有 3′→5′ 核酸外切酶校读活性，可在中等温度条件下进行高保真复制。   2、TelN 端粒酶（M0651）：TelN 端粒酶是由 NEB 首先克隆并重组的创新酶，分离自 N15 噬菌体，在 TelN 识别序列（56 bp）处切割 dsDNA，并在切割位置形成共价闭合末端。   3、核酸外切酶 III（M0206）：核酸外切酶 III 是 dsDNA-特异核酸外切酶，从线性或切刻双链 DNA 上沿 3′→5′ 方向水解核苷酸。  4、内切酶：NEB 内切酶种类齐全，可登陆 NEB 官网选择